CY5和CY5.5是兩種常用的遠(yuǎn)紅區(qū)（發(fā)射波長大于640 nm）熒光探針，因其光譜具有更強(qiáng)的組織穿透能力和更低的背景熒光而備受青睞。由于CY5/CY5.5的熒光成像相對比較特殊，對于常規(guī)熒光顯微鏡來說，需要提升CY5/CY5.5的熒光成像效果，通常是從以下四個維度做出改進(jìn)，1.攝像頭；2.熒光光源；3.熒光濾色片組；4.熒光物鏡；Mshot明美將從以上四個方面推出系列分享文章，今天我們留重點從攝像頭的維度來分享下如何提升CY5/CY5.5的熒光成像效果。

為什么CY5/CY5.5的熒光成像攝像頭選擇比較困難？對應(yīng)我們常規(guī)熒光顯微鏡的攝像頭選擇，一般是高靈敏度的彩色攝像頭方案，應(yīng)對最常見的DAPI,FITC,GFP,RFP,Mcherry 等熒光觀察和拍攝記錄，常規(guī)光譜響應(yīng)范圍380-650nm，同時一般在相機(jī)前端會配置有IR紅外阻擋片用來過濾紅外雜散光，確?？梢姽鈪^(qū)的成像效果。而CY5/CY5.5發(fā)射波峰值分別去到了670nm和707nm，對于常規(guī)攝像頭來說，熒光信號基本被屏蔽了，因此很多時候常規(guī)相機(jī)往往是捕捉不到CY5/CY5.5的熒光信號。

去掉相機(jī)紅外截止濾光片能提升效果嗎？既然紅外截止濾光片影響成像，那去掉這個濾光片，是不是就可以獲得跟黑白相機(jī)一樣的成像效果呢？答案是不一定。首先去掉紅外截止濾光片有代價，就是基本犧牲了明場成像。650nm以上的紅外信號會干擾彩色成像，使相機(jī)難以還原目鏡看到的真實色彩，并且這種偏紅超出白平衡設(shè)置能修正的范圍，拍攝HE染色片等明場樣品會有影響；第二個問題是傳感設(shè)計問題可能導(dǎo)致效果不佳。普通的彩色相機(jī)可能是前照式CMOS，在近紅外區(qū)域的光子效率并不理想，移除紅外截止濾光片并不能改善這個問題。而如果是BSI背照式CMOS，則在近紅外區(qū)域也有比較好的光子效率，成像雖然達(dá)不到BSI背照式sCMOS那么好，但屬于可用級別；最后一個是個微觀細(xì)節(jié)問題，但卻是大問題。彩色相機(jī)傳感前有個色彩濾波陣列(Color Filter Array)，用來根據(jù)波長對光線進(jìn)行濾波，比如典型的拜爾RGB濾鏡，每個像元有RGGB四格三色，R紅光只能通過1/4格空間到達(dá)傳感，也就是說，到達(dá)傳感的R紅光進(jìn)光量只有25%.而黑白相機(jī)沒有色彩濾波陣列，R紅光進(jìn)光量是100%，所以成像信號強(qiáng)度會好很多。

部分高靈敏度彩色相機(jī)可能會采用RYYB或者RCCB的色彩濾波陣列，Y濾波可以通過綠色和紅色的波長，C全透則是可以通過全部可見光波長，這兩種色彩濾波陣列的R紅光進(jìn)光量可能達(dá)到50-75%，更有利于獲得接近黑白相機(jī)的靈敏度，但目前并不普遍。